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蛋白結晶觀察顯微鏡安裝于哈爾濱工業大學
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北京長恒榮創科技

時間 : 2020-09-23 10:21 瀏覽量 : 385

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  蛋白結晶觀察顯微鏡安裝于哈爾濱工業大學


  1.1結晶方法(Crystallization Techniques)

  1.1.1分批結晶(Batch Crystallization)這是最老的最簡單的結晶方法,其原理是同步地在蛋白質溶液中加入沉淀劑,立即使溶液達到一個高過飽和狀態。幸運的話,不需進一步處理即可在過飽和溶液中逐漸長出晶體。一個用于微分批結晶的自動化系統已被Chayen等人設計出(1991,1992),其微分批方法中,他們在1-2μl包含蛋白質和沉淀劑的液滴中生長晶體。液滴被懸浮在油(如石蠟)中,油的作用是作為封層以防止蒸發,它并不干擾普通沉淀劑,但是干擾能溶解油的有機溶劑(Chayen,1997;see also Chayen,1998)。

  1.1.2液-液擴散(Liquid–Liquid Diffusion)這種方法中,蛋白質溶液和含有沉淀劑的溶液是彼此分層在一個有小孔的毛細管中,一個測熔點用的毛細管一般即可(如圖1.2)。下層是密度大的溶液,例如濃硫酸銨或PEG溶液。如果有機溶劑如MPD被用作沉淀劑,它會在上層。以1:1混合,沉淀劑的濃度應該是所期最終濃度的二倍。兩種溶液(各自約5μl)通過注射器針頭導入毛細管,先導入下層的。通過一個簡易的搖擺式離心機去除氣泡。再加入上層,進而兩層之間形成一個明顯的界面,它們會逐漸彼此擴散。Garc′?a-Ruiz and Moreno(1994)已經發展液-液擴散技術至針刺法。蛋白質溶液通過毛細力被吸入狹窄的管中,管的一端是封閉的。接著,開放端被插入置于小容器的凝膠中,凝膠使得管豎直,蛋白質溶液與凝膠接觸。含有沉淀劑的溶液被倒在凝膠上,整個裝置被保存于封閉的盒子以防蒸發。沉淀劑通過凝膠和毛細管的擴散時間可以由毛細管插入凝膠的深度控制,從而蛋白質溶液中即可形成過飽和區域,毛細管底部高而頂部低。這也可作為一個篩選最佳結晶條件的額外信息。



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