切片掃描不清晰是指在使用切片掃描儀對病理、生物或材料切片進行數字化成像時，得到的圖像模糊、細節不清、顏色失真或焦點不準，無法滿足診斷、分析或研究需求。這一問題是數字病理、數字顯微系統中最常見的成像質量問題之一。導致切片掃描圖像不清晰的原因多種多樣，既可能來源于切片本身的制備問題，也可能來自掃描設備的光學系統、焦距控制、圖像拼接算法、存儲壓縮方式等環節。

一、切片掃描不清晰的主要表現

圖像整體模糊，看不到細胞核、組織結構邊緣；

局部區域清晰，其他區域模糊，表現為“焦外”現象；

顏色偏暗、灰蒙或對比度低，組織邊界不分明；

掃描拼接邊緣處模糊、重影或不連續；

放大查看時，像素顆粒感重，細節不銳利。

這些表現會影響醫生閱片、AI識別、圖像分析等工作，必須查清根源并優化掃描流程。

二、常見原因分類解析

1. 切片本身制備問題

厚度不均勻：切片如果某些區域偏厚，掃描時容易因焦距無法全面覆蓋而模糊。

褶皺或氣泡：組織未完全鋪展或封片有氣泡，會使局部失焦。

染色不足或染色不均勻：如HE染色未充分清洗或退染，顏色層次不清，影響成像對比度。

脫片或干裂：玻片上的組織脫落、開裂也會引起圖像局部異常。

2. 掃描設備硬件問題

自動聚焦失敗：如果切片中無明顯紋理或系統識別錯誤，會導致焦點設定偏差。

物鏡或鏡頭臟污：鏡片污染或有灰塵會降低圖像清晰度，尤其在高倍掃描下更明顯。

光源衰減或分布不均：LED光源老化或燈光照射不均勻也會使圖像偏暗或發灰。

玻片未放平：載玻片未緊貼平臺或滑動中翹起，會造成成像面偏移。

3. 系統軟件設置問題

掃描分辨率設定過低：低分辨率（如10X、20X）適用于大體結構觀察，但不適合細胞級別診斷。

Z軸層數不足或掃描方式錯誤：對于組織厚的切片，如果不啟用Z-stack（多層掃描），容易漏掃焦點。

壓縮比例過高：圖片為節省存儲被壓縮，細節被損毀（如JPEG壓縮過度）。

圖像拼接算法誤差：尤其在大幅面拼接中，系統若未正確對齊圖像塊，會出現模糊接縫。

4. 操作與環境因素

掃描時震動或推片操作粗暴：人為因素導致玻片在掃描過程中輕微移動，影響成像清晰度。

環境光強變化：掃描時如環境有強光干擾或反射，可能造成圖像對比度異常。

溫濕度影響玻片穩定性：高溫高濕環境會引起玻片形變，從而使焦距不穩定。

三、常見解決方法

優化切片質量

使用厚度一致的組織切片（常見為4-5微米）；

避免切片褶皺、加強烘片和平片操作；

改進染色流程，確保顏色鮮明清晰；

清潔玻片并封片平整，避免氣泡殘留。

維護掃描儀設備

定期清潔物鏡、掃描頭、平臺；

校正自動聚焦系統，尤其在更換樣本類型時；

更換老化光源或調整照明均勻度；

檢查Z軸模組是否平穩移動，是否支持自動多層掃描。

合理設置軟件參數

提高分辨率，如選擇40X掃描用于細胞分析；

開啟“自動Z-stack”功能，適配厚片或組織起伏樣本；

使用無損或輕壓縮格式保存，如TIFF；

檢查圖像拼接策略，嘗試更新軟件算法版本。

環境與操作規范

保持平臺水平與防震；

在恒溫恒濕環境下操作；

操作員佩戴手套、防止污漬沾染鏡頭；

定期培訓操作人員熟悉軟件參數設置。

四、總結

切片掃描不清晰并非單一問題，而是多因素相互影響的結果。從切片本身、設備狀態、成像設置到操作規范，每一環節都可能成為成像質量的“短板”。面對模糊掃描圖像，用戶應從切片制備和設備調試兩方面入手，逐一排查，避免僅依賴重復掃描解決。