使用奧林巴斯 CX33 正置熒光顯微鏡觀察植物細胞內部細胞核與染色體，通常需要以下步驟：

奧林巴斯 CX33 正置熒光顯微鏡樣品準備

取材：選取合適的植物組織，如洋蔥根尖、大蒜根尖或植物的嫩葉等。這些組織細胞分裂較為旺盛，容易觀察到細胞核與染色體。

固定：將取材的組織放入固定液中，如卡諾氏固定液（乙醇：冰醋酸 = 3:1），固定一段時間，一般為 2 - 24 小時，以保持細胞的形態和結構。

解離：使用解離液（如鹽酸和酒精的混合液）處理固定后的組織，使細胞相互分離，便于后續的染色和觀察。解離時間通常為 5 - 15 分鐘，具體時間根據組織類型和材料大小而定。

漂洗：用清水或磷酸鹽緩沖液（PBS）對解離后的組織進行漂洗，去除殘留的解離液，防止解離過度，影響細胞結構，一般漂洗 3 - 5 次，每次 3 - 5 分鐘。

染色：常用的熒光染料是 DAPI（4',6 - 二脒基 - 2 - 苯基吲哚）。將漂洗后的組織放入 DAPI 染液中，室溫下染色 5 - 15 分鐘。DAPI 可以透過完整的細胞膜，與細胞核中的雙鏈 DNA 強力結合，在熒光顯微鏡下發出藍色熒光。染色后用 PBS 緩沖液漂洗至少 3 次，每次 3 - 5 分鐘，以洗掉未結合的染料。

奧林巴斯 CX33 正置熒光顯微鏡設置

開啟電源：打開奧林巴斯 CX33 正置熒光顯微鏡的電源開關，讓光源預熱穩定，一般預熱 15 - 30 分鐘，以保證光源的穩定性和發光強度。

選擇熒光濾光片：根據所使用的熒光染料選擇合適的濾光片組。對于 DAPI 染色，通常選擇紫外光激發的濾光片組，其激發波長在 358nm 左右，發射波長在 461nm 左右，可通過相應的濾光片組合來實現對 DAPI 熒光的觀察。

放置樣品：將染色后的植物組織樣品放在載玻片上，加蓋蓋玻片，注意避免產生氣泡。然后將載玻片放在顯微鏡的載物臺上，用樣品夾固定好。

對焦與觀察：先用低倍物鏡（如 4X 或 10X）找到樣品的大致位置，通過粗調焦旋鈕和微調焦旋鈕進行對焦，使樣品圖像清晰。然后切換到高倍物鏡（如 40X 或 100X），進一步調整焦距和光線強度，以獲得清晰的細胞核和染色體圖像。在熒光顯微鏡下，可以看到細胞核被染成藍色，呈現出圓形或橢圓形的結構。如果細胞處于分裂期，還可以觀察到染色體的形態變化，如在有絲分裂前期，染色體開始凝聚，變得可見；在中期，染色體排列在細胞中央的赤道板上；在后期，染色體被紡錘絲拉向細胞的兩極等。

圖像記錄：如果顯微鏡配備了成像系統，可以使用該系統拍攝細胞的熒光圖像，以便后續的分析和研究。拍攝時，要注意調整圖像的亮度、對比度和色彩平衡等參數，以獲得高質量的圖像。

奧林巴斯 CX33 正置熒光顯微鏡注意事項

染料安全：DAPI 是一種毒性物質與致癌物，操作時要戴上手套，避免接觸皮膚和吸入染液揮發的氣體。使用后要按照相關規定妥善處理染液和廢棄物。

防止熒光淬滅：熒光染料容易發生淬滅，因此在染色后要盡快進行觀察，避免長時間暴露在光線下。在觀察過程中，也應盡量減少不必要的光照時間，可以通過關閉熒光光源或使用遮光罩等方式來保護熒光樣品。

顯微鏡維護：定期對顯微鏡進行清潔和維護，包括清潔鏡頭、檢查光路系統、校準熒光濾光片等，以保證顯微鏡的性能和觀察效果。